ಪದೇ ಪದೇ ಕೇಳಲಾಗುವ ಸೆಲ್ ಕಲ್ಚರ್ ಪ್ರಶ್ನೆಗಳು

2. ಚೇತರಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದಿಂದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವಾಗ ಯಾವ ಸುರಕ್ಷತಾ ಕ್ರಮಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಬೇಕು?

ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದಲ್ಲಿನ ಕೋಶ ಕ್ರೈಯೊಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಮುಚ್ಚಲ್ಪಟ್ಟಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಅವುಗಳಲ್ಲಿ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕವನ್ನು ಸೋರಿಕೆ ಮಾಡುವುದರಿಂದ ಕರಗಿಸುವಾಗ ಕ್ರಯೋಟ್ಯೂಬ್‌ನ ತಾಪಮಾನವು ತೀವ್ರವಾಗಿ ಏರಿದರೆ ಸ್ಫೋಟಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು.ಆದ್ದರಿಂದ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದಿಂದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವಾಗ ಕನ್ನಡಕಗಳು ಮತ್ತು ರಕ್ಷಣಾತ್ಮಕ ಕೈಗವಸುಗಳನ್ನು ಧರಿಸಲು ಸೂಚಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಪುನರುಜ್ಜೀವನಕ್ಕಾಗಿ, 1-2 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಘನೀಕರಿಸುವ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕರಗಿಸಲು 37 ° C ನೀರಿನ ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ ಘನೀಕರಿಸುವ ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು ನಿರಂತರವಾಗಿ ಅಲ್ಲಾಡಿಸಬೇಕು.ನಂತರ, ಟ್ಯೂಬ್‌ನ ಹೊರಭಾಗವನ್ನು ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್ ವೈಪ್‌ನಿಂದ ಒರೆಸಿ, ನಂತರ ಅದನ್ನು ಅಲ್ಟ್ರಾ-ಕ್ಲೀನ್ ಟೇಬಲ್‌ಗೆ ತೆಗೆದುಕೊಂಡು ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ 10 ಮಿಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮೀಡಿಯಮ್ ಸೇರಿಸಿ, 5-10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 1000 ಆರ್‌ಪಿಎಂನಲ್ಲಿ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಮಾಡಿ, ತ್ಯಜಿಸಿ ಸೂಪರ್ನಾಟಂಟ್, ಸೂಕ್ತ ಪ್ರಮಾಣದ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಕಲ್ಚರ್ ಫ್ಲಾಸ್ಕ್ ಅನ್ನು ಇನಾಕ್ಯುಲೇಟ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು 5% CO2 ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್‌ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಿ.

3. ಕೋಶಗಳನ್ನು ದ್ರವರೂಪದ ಹಂತಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕ ತೊಟ್ಟಿಯ ಆವಿಯ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಏಕೆ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು?

ದ್ರವರೂಪದ ಸಾರಜನಕದ ಅನಿಲ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹವಾಗಿರುವ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಪುನರುಜ್ಜೀವನಗೊಳ್ಳುವ ಸಾಧ್ಯತೆ ಹೆಚ್ಚು.ದ್ರವರೂಪದ ಸಾರಜನಕದ ದ್ರವ ಹಂತದಲ್ಲಿ, ಲೈಯೋಫಿಲೈಸೇಶನ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು ಸರಿಯಾಗಿ ಮುಚ್ಚಿಲ್ಲದಿದ್ದರೆ ಅಥವಾ ಸೋರಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದರೆ, ಜೀವಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದ ನಡುವಿನ ನೇರ ಸಂಪರ್ಕವು ಕರಗಿದ ನಂತರ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ರಾಜಿ ಮಾಡಬಹುದು.

4. ಅಮಾನತು ಕೋಶಗಳಿಗೆ, ನಾನು ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಹೇಗೆ ಬದಲಾಯಿಸುವುದು?

ಅಮಾನತು ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸರಳವಾಗಿ ತಾಜಾ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ (ಸ್ಥಳವು ಅನುಮತಿಸಿದರೆ) ಅಥವಾ ಹಳೆಯ ಮಾಧ್ಯಮದಿಂದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ (5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 100 xg) ಬೇರ್ಪಡಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮತ್ತು ನಂತರ ತಾಜಾ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಅವಕ್ಷೇಪಿತ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಮರುಹೊಂದಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮಾಡಬಹುದು.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಮಾನತು ಕೋಶ ರೇಖೆಗಳಿಗೆ, ಮಧ್ಯಮವನ್ನು ಸರಳವಾಗಿ ಸೇರಿಸುವುದು ಉತ್ತಮ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ.ಯಾವುದೇ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ, ಜೀವಕೋಶಗಳು ತಮ್ಮ ದೊಡ್ಡ ಶುದ್ಧತ್ವ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ತಲುಪುವ ಮೊದಲು ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ನವೀಕರಿಸಬೇಕಾಗಿದೆ.ಜೀವಕೋಶಗಳ ಶುದ್ಧತ್ವ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಕೋಶ ರೇಖೆ ಮತ್ತು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ 3 x 10 5 ಮತ್ತು 2 x 10 6 ರ ನಡುವೆ ಬದಲಾಗುತ್ತದೆ (ವಿಶ್ರಾಂತಿ ಅಥವಾ ಸ್ಫೂರ್ತಿದಾಯಕ, ಆಮ್ಲಜನಕದ ಮಟ್ಟಗಳು, ಇತ್ಯಾದಿ.).ಜೀವಕೋಶಗಳು ಲಾಗರಿಥಮಿಕ್ ಆಗಿ ಬೆಳೆಯಲು ಸಾಕಷ್ಟು ಪೋಷಕಾಂಶಗಳ ಚೇತರಿಕೆಗೆ ಅವಕಾಶ ಮಾಡಿಕೊಡಲು ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಕೋಶ ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಬೇಕು.ಜೀವಕೋಶದ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡದೆಯೇ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸರಳವಾಗಿ ಬದಲಾಯಿಸಿದರೆ, ಜೀವಕೋಶಗಳು ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಕ್ಷೀಣಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಸಾಯುತ್ತವೆ.ಜೀವಕೋಶಗಳು ಅವುಗಳ ಚಿಕ್ಕ ಸಾಂದ್ರತೆಗಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಿದ್ದರೆ, ಅವು ಮಂದಗತಿಯ ಹಂತವನ್ನು ಪ್ರವೇಶಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಬೆಳೆಯುತ್ತವೆ ಅಥವಾ ಸಾಯುತ್ತವೆ.ಪ್ರತಿ ಸಸ್ಪೆನ್ಶನ್ ಸೆಲ್ ಲೈನ್ ವಿಭಿನ್ನ ಸ್ಯಾಚುರೇಶನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ಪ್ಯಾಸೇಜಿಂಗ್ ಮಧ್ಯಂತರವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ದೈನಂದಿನ ಸೆಲ್ ಎಣಿಕೆಗಳು ಅಮಾನತು ಸೆಲ್ ಲೈನ್‌ಗಳನ್ನು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡುವ ಮಾರ್ಗವಾಗಿದೆ*.

5. ಜೀವಕೋಶದ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗೆ ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾದ CO2 ಮಟ್ಟ ಯಾವುದು?

ಸೆಲ್ ಕಲ್ಚರ್ ಸಿಸ್ಟಂಗಳಲ್ಲಿ CO2 ಮಟ್ಟಗಳು 0.03% ರಿಂದ 40% ರಷ್ಟಿದ್ದರೂ (ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ವಾತಾವರಣದಲ್ಲಿ ಸುಮಾರು 0.03% CO2), ಗಾಳಿಯಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ CO2 ಅನ್ನು ಸೇರಿಸದಿರುವುದು ಅಥವಾ 5% ರಿಂದ 10% ರಷ್ಟು CO2 ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದು ತುಂಬಾ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿದೆ.ಅನಿಲ ಹಂತದಲ್ಲಿ CO2 ಮಟ್ಟದೊಂದಿಗೆ ಸಮತೋಲನಗೊಳಿಸಲು ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಸೋಡಿಯಂ ಬೈಕಾರ್ಬನೇಟ್ನ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಸರಿಹೊಂದಿಸುವುದು ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ.ಜೀವಕೋಶಗಳು CO2 ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಉಳಿವಿಗಾಗಿ ಸಣ್ಣ ಪ್ರಮಾಣದ ಕಾರ್ಬೊನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ.ಯಾವುದೇ CO2 ಅನ್ನು ಸೇರಿಸದಿದ್ದರೆ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶಗಳು ಗುಣಿಸಿದರೆ, 4 mM (0.34 g/L) ಜಲರಹಿತ ಸೋಡಿಯಂ ಬೈಕಾರ್ಬನೇಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಫ್ಲಾಸ್ಕ್ನ ಮುಚ್ಚಳವನ್ನು ಬಿಗಿಗೊಳಿಸಬೇಕು.ಸಂಸ್ಕೃತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗೆ 5% ಅಥವಾ 10% CO2 ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ, 23.5 mM (1.97 g/L) ಅಥವಾ 47 mM (3.95 g/L) ಸೋಡಿಯಂ ಬೈಕಾರ್ಬನೇಟ್ ಅನ್ನು ಕ್ರಮವಾಗಿ 37 ° C ನಲ್ಲಿ, ಆರಂಭಿಕ pH ಸುಮಾರು 7.6 ನೊಂದಿಗೆ ಬಳಸಿ.ಈ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ, ಫ್ಲಾಸ್ಕ್ ಅನ್ನು ಮುಚ್ಚದೆ ಬಿಡಬೇಕು ಅಥವಾ ಅನಿಲ ಸಮತೋಲನವನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಪೆಟ್ರಿ ಭಕ್ಷ್ಯವನ್ನು ಬಳಸಬೇಕು.

6. ಕೆಲವು ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ ಸೋಡಿಯಂ ಪೈರುವೇಟ್ ಏಕೆ ಬೇಕು?ನಾನು ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ಎಷ್ಟು ಸೋಡಿಯಂ ಪೈರುವೇಟ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಬೇಕು?

ಪೈರುವೇಟ್ ಗ್ಲೈಕೋಲೈಟಿಕ್ ಪಥದಲ್ಲಿ ಸಾವಯವ ಆಮ್ಲದ ಮೆಟಾಬೊಲೈಟ್ ಆಗಿದೆ* ಇದು ಕೋಶವನ್ನು ಸುಲಭವಾಗಿ ಪ್ರವೇಶಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಬಿಡುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ಸೋಡಿಯಂ ಪೈರುವೇಟ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದು ಶಕ್ತಿಯ ಮೂಲ ಮತ್ತು ಅನಾಬೊಲಿಸಮ್ಗೆ ಇಂಗಾಲದ ಮೂಲ ಎರಡನ್ನೂ ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ, ಕೆಲವು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಕೋಶಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಜೀವಕೋಶದ ಅಬೀಜ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿಗೆ ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಅಥವಾ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಸೀರಮ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಕಡಿಮೆಯಾದಾಗ ಅಗತ್ಯವಾಗಿರುತ್ತದೆ.ಸೋಡಿಯಂ ಪೈರುವೇಟ್ ಪ್ರತಿದೀಪಕ-ಪ್ರೇರಿತ ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಸೋಡಿಯಂ ಪೈರುವೇಟ್ ಅನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 1 mM ನ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ವಾಣಿಜ್ಯಿಕವಾಗಿ ಲಭ್ಯವಿರುವ ಸೋಡಿಯಂ ಪೈರುವೇಟ್ ದ್ರಾವಣಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 100 mM ಶೇಖರಣಾ ಪರಿಹಾರವಾಗಿದೆ (100X).

www.DeepL.com/Translator (ಉಚಿತ ಆವೃತ್ತಿ) ನೊಂದಿಗೆ ಅನುವಾದಿಸಲಾಗಿದೆ.